為什麼這篇勝任細胞氯化鈣鄉民發文收入到精華區：因為在勝任細胞氯化鈣這個討論話題中，有許多相關的文章在討論，這篇最有參考價值！作者bolly (bolly)看板Biotech標題[求救] competent cell製作時間T...
我們實驗室之前都是直接買kit作transform
但是我覺得有點浪費 所以想試著自己作作看
我用一瓶看起來有點年代的氯化鈣配製成0.1M溶液(已滅菌)
將0.5ml over-night菌液加入50ml LB養到OD 0.4
3200g離心去除上清液 加入20ml氯化鈣使懸浮
置冰上40min 離心10min 去除上清液
最後加1ml氯化鈣重新懸浮 分裝0.2ml一管
製作的菌種是DH5aphla 和BL21(DE3)
直接作transform 但是都長不出來
我想請問製作過程還需要注意什麼小細節
因為我是自己摸索 已經作過好幾次都不成功
之前有請別間實驗室的學姐教過 有作出來
但是使用的藥品是他們實驗室配的
回來自己作的幾次都失敗 很灰心= =
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※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc)
◆ From: 140.120.202.50
推 elite2:3200g，感覺有點快，我們都只是1000g而已，參考看看吧 09/30 13:40
→ bolly:1000g是離心多久呢 09/30 14:11
→ davideason:做這個超搞剛~連細菌生長狀況都要監控~用買的拉 09/30 14:50
推 tsubasawolfy:OD0.6已經快要過log期了吧- - 09/30 15:12
→ tsubasawolfy:我們是0.375 通常0.32-0.35就會拿起來用了 09/30 15:12
→ tsubasawolfy:還有CaCl2也要加一些東西 09/30 15:13
推 konlon:做完放在四度冰箱 12-24小時使用 可增加效率 09/30 16:36
→ bolly:上面我有打錯 應該是OD 0.4 抱歉 09/30 16:38
※ 編輯: bolly 來自: 140.120.202.50 (09/30 16:39)→ bolly:所謂的氯化鈣要再加一些東西是哪些東西? 09/30 16:40
推 thshf:CaCl2我會wash兩次，最後一次resuspend會多加glycerol抗凍 09/30 17:23
推 cryosakura:小弟若沒全程在cold room做，也會全程在冰上 09/30 18:00
→ cryosakura:不用pipette up and down來resuspend,要溫柔... 09/30 18:04
→ cryosakura:CaCl2重配一罐,再試一次吧! 09/30 18:05
→ alaric:2500xg, 2400xg 09/30 20:29
→ bolly:氯化鈣我再向別間借一些來試試看吧 10/01 00:56
推 jabari:原po可以去參考Q牌QIAexpressionist系列裡面的作法 效果好 10/01 00:57