為什麼這篇pcr電泳結果判讀鄉民發文收入到精華區：因為在pcr電泳結果判讀這個討論話題中，有許多相關的文章在討論，這篇最有參考價值！作者t5r4e3w2q123 (jacky1227)看板Biotech標題DNA電泳圖判讀時間Fri...
各位前輩好～～
由於小弟是化工系對於電泳圖的判讀不太了解，請各位前輩多多指教～
以下是小弟使用自製的pcr平台所跑出來的沙門氏菌DNA電泳圖（目標位置200bp)
https://i.imgur.com/gPtlVAJ.jpg
謝謝大家～～
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※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc), 來自: 36.234.58.80
※ 文章網址: https://www.ptt.cc/bbs/Biotech/M.1556895334.A.F31.html
→ milkpa: all genomic DNA 05/04 00:32
推 Bows: PCR失敗 05/04 01:18
→ t5r4e3w2q123: 請問樓上兩位前輩造成失敗的原因是因為DNA未打開嗎 05/04 07:49
→ t5r4e3w2q123: ？ 05/04 07:49
推 lelojack: 你們的band跑的不錯欸 05/04 08:32
推 as862437: PCR 失敗沒東西，最上面的是gDNA 05/04 10:15
→ turtle24: 總覺得這是1kb marker, 最下面是500bp嗎 05/04 10:29
→ turtle24: 或250bp 05/04 10:29
→ t5r4e3w2q123: T大前輩最下面是100bp 05/04 10:47
推 ernielwl: 1.marker大小要標示出來,你在做報告的時候最好也這樣 05/04 11:44
→ ernielwl: 對別人判斷上會比較容易了解 05/04 11:44
→ ernielwl: 2.sample條帶跑在marker最大片段位置甚至更上方一些 05/04 11:45
→ ernielwl: 這個是genomic DNA, 如果實驗有經過pcr那結果是失敗的 05/04 11:46
→ ernielwl: 3.做pcr之前你的template最好可以定量一下,下pcr的量不 05/04 11:47
→ ernielwl: 要太多 05/04 11:47
→ ernielwl: 最後三個跑道明顯是過量了.... 05/04 11:47
→ t5r4e3w2q123: 好的謝謝E大前輩的建議，不過我是同一管pcr試劑下去 05/04 12:02
→ t5r4e3w2q123: 做實驗的，條件只有調整pcr溫度 05/04 12:02
→ jsi: 樣品若是agar上的菌落，用無菌tip尖端沾一下菌落，少到幾乎看 05/04 12:36
→ jsi: 不到的量作為pcr template。樣品若是菌液或DNA，可搜尋網路上 05/04 12:37
→ jsi: pcr template amount有建議用量，若沒有定量儀器，可以試著將 05/04 12:38
→ jsi: 菌液或DNA作數個10X連續稀釋，分別做為template進行PCR，應能 05/04 12:40
→ jsi: 看見結果。有問題可再把結果放上來詢問看看。 05/04 12:41
推 ernielwl: primer加錯或是專一性不足,Taq沒加到或壞掉 05/04 15:35
→ ernielwl: annealing溫度不對,這些都有可能 05/04 15:36
→ ernielwl: 實驗新手最好還是有一個人可以帶著你做一次 05/04 15:38
→ t5r4e3w2q123: 謝謝各位前輩的建議～～ 05/04 15:52
推 lail: 有positive control嗎？確定primer都可以用，且試劑都沒問題 05/04 18:35
推 beraks: 我的經驗是沙門氏菌不用純化genomic 05/06 10:17
→ beraks: 培養液25/1就跑的出來，我是跑invA 05/06 10:18
推 qiet: 要有positive control阿, 不只是sample, 连PCR平台也是要用 05/06 13:45
→ qiet: 确定是能用的机器来跑, PCR条件也都要确定 05/06 13:45