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pcr溫度設定 在 北歐心科學 NordicHearts Facebook 的最讚貼文
那時,彼得進前來,對耶穌說:「主啊,我跑PCR若失敗了,我當重跑幾次呢?到七次可以嗎?」 耶穌說:「我對你說,不是到七次,乃是到七十個七次。」
PCR(聚合酶連鎖反應),是利用懂得複製DNA的「聚合酶」,不斷將指定DNA複製倍化的過程。COVID的PCR檢測,就是以此技術為基礎,加上螢光訊號,讀出DNA相對的含量。
那麼,聚合酶如何知道複製什麼片段?就是靠一對稱為引物(Primer)的短序列片段,一個標註起始序列,一個標註結束聚列。這就像Word的find功能,請你幫我從「so I say I love you」,複製到「笑著去吃苦」。不過,這只是完美情況的講法,因為引物可能會有偏差,把”so I say I f**k you”開始的片段也複製出來,況且,本來就有很多歌有”so I say I love you”,就算不偏差,也會複製錯別的歌。
要知道跑出來的東西是否正確,其中一個方法,是把成品DNA放在大菜糕上,用電場使本帶負電荷的DNA從負極游泳泳到正極。由於不同大小的DNA,游泳速度是不同的,可以藉此看到DNA大小。如果你看到是37字大小的DNA,就知道複製對了姜B的歌。這方法叫電泳(electrophoresis),不過無論中英我們也會說DNA在「跑」。
圖中就是最後一次PCR實驗的電泳結果。這週,我共試了五對Primers,八個溫度設定,兩種聚合酶,總共跑了七個七次,終於跑出一點結果。上面那排,是基於兩篇不同文章,分別發表,聲稱有用的Primers,跑出狗屎一樣的雜訊。(因為誤信他們,在此之前我已經跑了六次。)下面藍色的,才是目標DNA。
人家聲稱是已「最佳化」的PCR,不要信,自己跑一下才知道。要不跑出狗屎也當真,就不太好啦。
(不要問有些Lane為什麼這麼醜,我沒變Hulk用金居福爆橘拳捏爆他已經非常好脾氣了。)
#得罪了PCR小精靈