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2021-02-17 11:04:21
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很久之前在板上有問過關於細胞冷凍的方法
我們lab目前是仍然是這樣的，有4度/-20度冰箱 和液態氮
之前保存細胞時都是配好90%的DMEM+10%的DMSO
直接放到-20度 1~2小時 之後丟入液態氮
因為之前養的都是3T3，細胞保存密度約有2~5*10^6 /mL
每次解凍雖然沒有細數，不過總之就是細胞仍能健康繼續養的程度
後來在一本"組織工程" (徐善慧老師著)上
看到在液態氮管口放30分鐘就可直接凍入液態氮中的方法
不知道有沒有人試過?
因為最近養的細胞比較珍貴，很怕把他養死
想問的是，為什麼冷凍時medium有時會呈粉紅色，有時候會變成橘色或黃色?
如果變色，細胞會不會死掉??
因為
1.在液態氮管口30分鐘的細胞，要放進去時變成鮮黃色，過段時間在看變有點橘
2.在-20度30分鐘，管口30分鐘在放進去的是粉紅色
3.在-20度1.5小時的也是粉紅色
不過，組1用的是分裝成50mL小管，50mL滿的medium(本來就偏橘)
組2.3用的是50mL小管中最後的5mL(本來就偏粉紅)
想請問板上的強者先進們這些現象是正常的嗎
如果我在一兩天之後解凍這些細胞，測試存活度，和一兩個月後解凍的效果是否相同?
有許多問題希望有人能回覆，非常謝謝!!!
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※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc)
◆ From: 140.112.182.185
推 aceliang:有一種可以放在液態氮桶口旋轉下降的凍細胞工具。 10/16 18:27
推 spirithorse:我也發現同一批凍的細胞,從液態氮拿出來後顏色會不同 10/16 18:32
→ spirithorse:但是解凍後沒有什麼影響. 細胞放在-20結凍後,盡量隔 10/16 18:32
→ spirithorse:天就丟到液態氮桶裡,我有解凍過學姊放在-20半年的 10/16 18:33
→ spirithorse:細胞...死一堆.所以是有差的!!(推眼鏡) 10/16 18:33
推 Realthugz:因為一般都放-80 10/16 18:39
推 conective:一般應該是4→-20→-80→液態氮 10/16 18:41
推 moons:我們都放漸凍盒直接丟-80，隔天放液態氮 10/16 21:59
→ spirithorse:天阿~我打錯了~ 我是丟-80.... 10/16 23:03
推 allisa:放漸凍盒再放到液氮裡是比較好的做法 提高存活率 10/18 13:47
→ allisa:變色是不會影響 我們也有這種情形 10/18 13:48
推 Realthugz:能夠不用isopropanol嗎 @@ 會死翹翹吧 10/18 15:16
推 allisa:isopropanol不會跑到凍管裡阿 為什麼會死翹翹?? 10/19 00:20
→ allisa:或者現在有新型漸凍盒不用加isopropanol的 10/19 00:21
→ Realthugz:XD 我的意思是能夠不用凍盒直接進冰箱嗎 10/19 20:01
推 coolamber:老師給我們的步驟是4度 30min→-20 2hr→-80 overnight 10/20 03:26
推 coolamber:→液態氮 然後...medium變色是ph值有變化了吧... 10/20 03:29