Fluorescence spectroscopy

就是 給你能量 你放光給我看

就是有機實驗點TLC的那個 用UV燈顯色的那種啦

然後電子躍遷遵循 Franck Codon principle 電子組態改變但是形狀不會變

但是每個電子組態的基態就是長的不一樣 所以只好往上找其他振動態

所以 從 S0 基態跳上去之後 會到S1 的不知道哪個形狀一樣的振動態

然後會有各種不同的relaxation跟 conversion

1. internal conversion: 電子組態不同 但是能量相同

2. external conversion: 電子組態不同 外加散失能量(不放光)

3. intersystem conversion: 從Singlet 到 triplet的交換


螢光光譜的特點

呈鏡像但是本來應該重疊的譜線有一點偏差

1. 鏡像

因為 振動能階等差(就是該死的簡諧振子)

你可以畫 一個兩個電子能階 E=1 E=6

以及三個 振動能階 這樣就可以組成 E= 1, 2, 3, 4

E= 6, 7, 8, 9 兩組

從E= 1 上去到 上面那組 可以有 delta E = 5 6 7 8

E= 6 下去 可以得到 delta E = 5 4 3 2 這樣組合起來就有

2 3 4 5 5' 6 7 8 對稱的譜線了 然後雖然是能量 不過換成nm當波長也差不多對
稱這樣

2. 有一點點差異 那個 5 跟 5'

因為他跳上去之後啊 總是會有一點莫名其妙的relaxation 所以螢光那個 能量差會
稍微小一點


偵測器的位子跟光源成九十度 因為 你總不想測到光源吧XD

然後光源的話可以打入最大吸收的那個光 這樣才可以吸飽飽 放一堆光


這種偵測方式又稱作 luminescence

敏感度高 放射光強 I = k P(光源)C(濃度)

光源強一點敏感度就好一點

只是濃度太高還是會往下掉(self- absorption)



Beacon Molecule: 就是那個DNA分子平常沒事的時候會自己左右兩邊黏在一起

上面的發光團旁邊的消光團就會把他消掉

等到你的目標DNA出現就會把他們兩個拉開 就有光啦

(DNA說要有光 就有光(誤))

FRET Fluorescence Resonance Energy Transfer
重點是說有兩個螢光團 A B

A 吸收 藍光放綠光 B 吸收綠光放紅光

所以AB在一起的時候 你會看到紅色

分手的時候就會看到綠色

Chemiluminescence: 利用化學反應的時候發的光定量

最有名的就是 luminol跟 NO+ ozone吧

luminol + 血 ----> 藍光

NO + Ozone ---> NO2* ---> NO2 + hv

標記的方法大概有四種

1. radioactive

2. fluorescence

3. chemiluminescence

4. bioluminescence

5. enzyme labeling( 會把無色的受質 變成有色的受質)



EMIT Enzyme multiplied immunoassay technique

首先 有一個抗體可以抓你要測的分析物X

現在杯子裡面有限量的抗體 跟已知量的 有標記的X(上面的酵素可以把無色的受質變有色
)

只是一接上抗體就哭哭了

所以 X 越多 能跟抗體接的 XE就越少 XE自由得多 被變成有色的受質也多

就這樣



Solid Phase immunoassay

就是把抗體1黏在杯子上 這樣你的分析物X 沖進去的時候就可以黏在上面

再把抗體2放進去 抗體2上面的標記可以是放射性的

或是 酵素! 就是ELISA enzyme linked immuno sorbent assay


CRDS cavity ring down spectroscopy


光源 --> [ 樣品 ] ---> 偵測器

光只進不出 光一次只能出來一點點

所以光會在裡面來回走啊走 會一直被吸收 所以偵測器可以測到跟時間有關
的decay


Raman spectroscopy

1. Rayleigh scattering : 能量不變的散射(彈性碰撞)

Raman scattering: 能量有一點改變的散射(shift)

2. 簡單來說就是分子被基發上去之後沒有回到原來的地方

從基態出發但是沒回到基態(E變小 波長變大) --> Stokes line(強度大)

從激發態出發但是回到基態(E變大 波長變小) --> Anti-Stokes line(強度小)


光學元件用 FT-Raman 就是用干涉儀了啦

光源是單波長的雷射