為什麼這篇細胞膜上的蛋白質鄉民發文收入到精華區：因為在細胞膜上的蛋白質這個討論話題中，有許多相關的文章在討論，這篇最有參考價值！作者ftsyice (Matt)看板Biotech標題[求救] Western & 細胞膜上...
細胞膜上的蛋白質 在 陳默君 彩妝保養｜素人改造｜創業教練｜生命密碼 Instagram 的精選貼文
2020-06-03 14:48:13
什麼是水通道蛋白，與肌膚保濕有什麼關係？ 水通道蛋白是存在於皮膚中角質細胞膜上的蛋白質。水通道蛋白形成隧道狀孔，允許水穿過細胞膜。 在人體的皮膚上，因為表皮層沒有血管，無法透過血管來運輸營養及水份。 而水通道蛋白就對水分在皮膚裡的擴散扮演了重要的角色；若皮膚中水份含量減少，會發現肌...
這問題困擾我很久了,我想請問大家
平常抽Protein的順序為加入RIPA buffer後,12000RPM,及可跑SDS PAGE
但如果要看其他的膜上蛋白,例如NA/K幫浦,離子通道蛋白等..
是否非得用超高速離心機才可做呢?
小弟研究的主題為Aquaporin 5 (AQP5)
in vitro
使用細胞為A253 (唾液腺體),使用普通的total lysis抽蛋白質後
配合Advance ECL,可以壓出AQP5
in vivo
SD-RAT活體的組織就撞牆了,壓不出AQP5
我想到的可能性有三點
1.)是lysis buffer使用錯誤? (RIPA、HEPES、UREA??)
2.)唾液腺體成份特別,比起其它的組織,抽取蛋白質的方式不一樣?
3.)膜上的蛋白質,得將膜分離出來後,才壓的出來?
(有文獻使用超高速離心,將細胞膜離出後再跑SDS PAGE)
想問有經驗的同行
傳統的total lysis抽不到的膜上特定蛋白.
是否會因為分離出膜後,才能順利壓的到呢?
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※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc)
◆ From: 210.60.122.14
推 aceliang:亂入一下，A549是唾液腺體??? 04/01 16:18
→ g010377:A549好像是lung carcinoma cell? 04/01 16:43
謝謝提醒,A549是我的control,唾液腺體是A253 Orz※ 編輯: ftsyice 來自: 210.60.122.14 (04/01 16:51)
推 vandia:NKA一般不用離高速就有,除非你的nka量很少.. 04/01 17:06
→ vandia:我做過NKA,VHA,NKCC,NHE...都只要離2萬g就可以囉.. 04/01 17:07
推 firstfrost:原po我居然認識= = 用Kit啦 砸錢下去吧~~~ 04/01 20:03
推 reinherd:有沒有嘗試過sonication? 可以幫助萃取膜蛋白 04/02 09:38
→ reinherd:我曾經有遇過用ripa抽蛋白壓不出來 但是改用sds抽就壓出 04/02 09:39
→ reinherd:來 我覺得您可以參考看看 04/02 09:39
→ reinherd:我先聲明我做的和你差很多 不一定適用 04/02 09:40
→ vandia:推樓上 我們家就是用sonication 04/02 11:47
推 celestial318:我們家看膜上蛋白也都是用sonication 04/03 02:40
推 hc0122:可能得加protease inhibitor tissue中有很多protease 04/03 17:59