※ 引述《day112 (ken)》之銘言：
: As title
: 通常細胞實驗都會要求 three independent test
: 但最近遇到我覺得蠻困惑的問題，
: PI 表示用同一組sample triplicate 即可。
: 我自己是定義這種叫技術性三重複啦......
: 但我以為所謂三重複應該是biological repeat,這個實驗室貌似認為首先biological rep
: eat不容易，二來技術性三重複的SD才會小，data才漂亮。
: 想請教板上先進前輩，所謂三重複的定義是什麼呢?
對於d大提到的說法，

的確是有點誇張，

正常的PI不會想把sample跑三次，

(d大實驗是醫生嗎？有大數據的概念，還是有鑽研過過統計？

知道要達到統計上的差異，一個是增加樣本數如同樣實驗做個一百次，

但因N無法大就想辦法讓SD儘量縮小)

尤其現今又有"Simple Western"，

同樣的sample load進去，

Error bar極小，(或者根本一模一樣吧)

照d大實驗室的說法，

只要做實驗一定有統計上的差異。

(只是別人無法repeat，下次實驗室另外個成員來做，結果可能相反且還是有統計差異)

對於三重複我也有些疑惑，

為了簡化問題，

以下都以Western blotting的例子來提問，

大家常用的作法應該是使用三代的細胞分三個不同時間跑？

還是趕時間直接分成三組細胞？

使用三代的細胞來跑應是符合多數人的認可，

但假設加了A藥之後，

實際上(指多數有經驗的操作者)會造成實驗組B基因的表現相對於控制組上升20%，

老闆預期的結果也是實驗組相對於控制組要得到上升的趨勢，

利用三個時間點來跑，

實驗組相對於控制組可能得到105%, 120%, 135%，

但上面的結果很遺憾沒有達到統計上的差異，(以雙尾p<0.05視為統計上顯著差異)

以WB來說因為步驟繁瑣，

沒跑過上百片技術上要小於20%真的很有難度，

(還有某些實驗先天上的誤差根本就超過這數字)，

所以對於某些paper用定量在band上標示個1, 1.1(但視覺看不出差異)，

實在很難讓人相信這樣的實驗能夠repeat。

因此，所以我會告訴學弟妹找題目要找個倍數相差很多的，

最好差個100倍，(但通常沒這麼好做的題目，這種題目一定很容易發現，

老早就被做光了)

因為我知道碩班二年的訓練(實際做實驗一年半就要偷笑了)，

要讓實驗誤差極小是不大可能。

回到剛剛的例子，(指實驗組相對於控制組得到105%, 120%, 135%)

上述的狀況大家會多做一組以達到統計上差異嗎？

還是PI就說直接取135%的圖，看起來差異最大，不須多跑？

同樣的例子，

(實際上(指多數有經驗的操作者)會造成實驗組B基因的表現相對於控制組上升20%，)

讓一個新手操作，他得到實驗組相對於控制組的數據為70%, 120%, 170%

(平均仍為120%)

可以注意到第一組的樣品(實驗組相對於控制組)看起來是下降，

但另外兩組的樣品是上升，

想請教各位的老闆的作法會如何呢？

(1)讚，取170%那一組，這新手做的圖差異性比老鳥還棒

(2)已做三重複，趨勢大致呈現上升，符合預期，準備下一步的實驗

(3)雖然做三重複，但二上升一下降，再多做一次，至少要有三次上升的結果

(4)再做個幾組，例如後來得到150%, 160%，到時去掉70%與120%，

取150%, 160%, 170%，就能有統計上差異

(5)為了追求科學真理，要不斷重複，直到統計上的p值小於0.05

(6)找別人來repeat實驗

再請各位版友提供點實際操作的意見，

雖然這是某種較為苛刻的例子

(實驗組僅較對照組上升20%，但如果確定真的上升就代表對生物體有某些意義，

不能忽視它的存在)，

大家也都知道第五個做法最符合科學，

但第五個作法可能讓一個研究生花了三個月都還在做同一個實驗，

如果手殘，根本沒機會畢業。

再請諸位先進提出見解，感謝！


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