為什麼這篇pfa意思鄉民發文收入到精華區：因為在pfa意思這個討論話題中，有許多相關的文章在討論，這篇最有參考價值！作者cathy50121 (阿希希)看板Biotech標題[求救] 4%PFA固定細胞問題時間Wed...
pfa意思 在 Cindy如如 Instagram 的最佳貼文
2021-08-02 03:53:15
#fullyvaccinated 💉💙 打完兩劑疫苗過了兩個多禮拜了 意思是疫苗已經可以在我身上發揮最大效用了 打第二劑時有一個有趣的事 醫護人員看到我的卡介苗疤痕 就問為什麼我會有這個 我說這是另一種疫苗 台灣每個人都有這個疤痕喔！(基本上啦) 然後他就把第二劑不偏不倚注射在我的疤痕旁 而打了第...
想請問各位做過ICC的大大們，
事情是這樣的，我們老師要求我在做ICC之前先試試用PFA固定細胞(在tube裡)，然後上Flow cytometry來確認PFA固定會不會影響到抗體的binding，所以我剛才就試著用上flow的方式來固定細胞，但是在PBS wash兩次之後細胞就消失了，根本還來不及stop
請問用PFA固定細胞是不是一定要貼片的細胞呢？？我不知道問題出在哪裡QQ
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→ cyc5566: 我上flow是用酒精固定,不是PFA 04/26 12:55
→ cathy50121: 我們老師想用flow確認PFA固定會不會影響到抗體binding 04/26 13:03
→ cathy50121: ，確認之後才可以做ICC 04/26 13:03
→ tz2733: 細胞就消失是什麼意思?肉眼在tube看不到pellet嗎? 應該只 04/26 15:04
→ tz2733: 是離心次數多了 流失細胞使細胞數變少而看不到 且PFA固定 04/26 15:04
→ tz2733: 似乎會使細胞變小而更看不到pellet 但硬作下去上機還是有 04/26 15:04
→ tz2733: 機會看到細胞的... 只是要試為何不就直接用ICC試? 04/26 15:04
→ a90648: 我全血有用過PFA, acetone和Glutaraldehyde都固定沒問題 04/26 15:05
→ lail: 肉眼看不到但是可能還是有細胞 04/26 15:26
→ cathy50121: 我也想問我們老師為什麼要我用flow上QQ 04/26 15:48
→ cathy50121: 請問全血如果用福馬林對血球會很傷嗎？？ 04/26 15:49
→ cathy50121: 等等去上機看看，希望開獎成功 04/26 15:49
推 Ianthegood: "formaldehyde對細胞很傷嗎"??? 所有fixation都是直 04/26 16:28
→ Ianthegood: 接把細胞殺死並且保存某種特性啊 pfa主要是morphology 04/26 16:28
→ Ianthegood: 你的protocol是什麼? 04/26 16:29
→ cathy50121: 我這次上flow是先用FACS回溶後離心，加同體積的pfa冰 04/27 13:02
→ cathy50121: 上固定15分鐘，再離心後用pbs洗兩次，過程全部在tube 04/27 13:02
→ cathy50121: 內，洗兩次後就看不太到細胞了所以沒有洗第三次，也沒 04/27 13:02
→ cathy50121: 有stop，就直接染色然後上機 04/27 13:02
→ Ianthegood: 離久一點啊 fix後會比較強壯 04/27 15:36
→ cathy50121: 喔喔好的！那轉速需要提高嗎？？我是用1800rmp 04/27 18:03
→ Ianthegood: 在沒有rotor information的情況下rpm一點意義都沒有 04/28 00:03
→ Ianthegood: 請報g值 04/28 00:03
→ Ianthegood: 先離久一點看看 不夠再加速 04/28 00:04