為什麼這篇hplc滯留時間往後鄉民發文收入到精華區：因為在hplc滯留時間往後這個討論話題中，有許多相關的文章在討論，這篇最有參考價值！作者tony15899 (急速せんこ~)看板Chemistry標題Re: [實驗] HPLC col...
※ 引述《scy2468 (scy)》之銘言：
: 目前發現問題:
: 分析物(較親水的)滯留時間會改變，提前流出，而且時而正常時而不正常。
: 正常時分析物的感度訊號良好與以往同
你的問題看起來是沒有設定層析梯度的平衡時間，
假設方法是從20%甲醇逐漸升到100%甲醇後結束，
當沒有設定平衡時間時，即便到下一針前pump會回到20%甲醇狀態，
但這時間太短所以並不足以把管柱內流洗夜全部置換成20%甲醇，
(所以管柱內溶液甲醇比例會高於20%)
當你下一次進樣後因為管柱內甲醇比例較高，波鋒會觀察到滯留時間往前移
解決方法是設定一段平衡時間，舉例：
時間(mins) 甲醇比例
0 20%
10 100%
15 100%
16 20%
25 20%
16~25分鐘就是平衡管柱時間，這段時間要多久不一定
你可以嘗試設定5或10分鐘(可能更久)，只要滯留時間不再飄移就可以
很多文獻方法不會顯示平衡的時間，這點要特別注意
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→ scy2468: 之前結果正常，會不會咖冷壞了，還是有甚麼東西汙染，但 04/27 13:41
→ scy2468: 是我洗一個晚上，壓力沒什麼變化，壓力也沒有特別高 04/27 13:41
→ tony15899: 除非你使用強酸鹼去破壞管柱 LC管柱是極度耐用 04/27 17:39
建議不要有"以前這樣做可以，所以方法絕對沒問題"的想法
請去設定"每一針"樣品的平衡時間，你在打之前洗再久都無法解決每一針梯度平衡的問題
再無法解決重配流洗液，說不定手滑配錯濃度
還是有問題就該懷疑pump混和溶液那塊是否出現異常
除非使用的是老舊無法確認狀況的管柱，一般管柱很少會出問題，頂多是連接管漏液
※ 編輯: tony15899 (59.120.59.210), 04/27/2016 17:50:29
推 scy2468: 感謝Tony哥回答 04/28 00:05
→ scy2468: :D 04/28 00:05