FACS是最陽春的流式細胞儀

不過如果你是新手，建議你找個人幫你看看所有的設定有沒有問題

我假設你有人可以幫你操作機器，幫你找到細胞群

(有很多新手一開始完全不知道自己到底在看什麼，細胞到底在哪裡)

以下是你需要準備的sample

1. neg ctrl-

最理想的negative control是isotype control

也就是由同一種動物得到的同一類抗體，但是並沒有抗原專一性

主要是測non-specific binding的background

舉例說明，如果你用的抗體是

Rat anti-mouse CD4-FITC, IgG2a kappa chain

它的isotype control就是

Rat anti-mouse IgG2a, Kappa-FITC (BD Pharmigen, Cat No. 554688)

同樣的，你也會需要另外一支 PE-conjugated isotype control

當作 Rat anti-mouse CD25-PE

2. compensation controls

(1) FITC only
(2) PE only

FITC and PE的emmission會overlap,沒有經過校正，

single positive的訊號會被誤讀為double positive

要做這種校正

你需要只染單一顏色的樣本(一管樣本只有一個顏色)

通常我們都會找細胞一定會表現的表面抗原作這種control

譬如說你做的是T細胞

你可以用

(1) CD4-FITC
(2) CD4-PE

這種control不但可以用來做compensation
可以讓你知道你的染色過程有沒有問題

3. 你的real sample

-染上CD4-FITC加CD25-PE


至於怎麼做四象限區分(qua-plot)，下一篇再說好了
我不喜歡念洛洛長的文章

everblue

※ 引述《[email protected] (創造自己的世界)》之銘言：
: 最近要看CD4+CD25+T cell 的表現量
: 一個是染FITC 另一個染PE
: 請問有哪位大大有這種三色螢光染色 ( 流式細胞儀 ）的作法呢 ?
: 因為我們家我算第一個作這種T 細胞亞群, 所以完全不行
: 要是有哪位高手家是用 BD的 FACS
: 也麻煩請您指導一下怎麼使用四象限區分 orz
: 都要畢業了才給我出難題的老闆 ...orz

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◆ From: 67.10.241.33