各位好

最近要做蝦紅素抗氧化能力的檢測

知道有一種檢測抗氧化活性方法叫"DPPH"



老師他有拿一罐DPPH溶液給我了(只知道他是DPPH+甲醇，濃度我不知道)

我照著期刊比例加入代測物，室溫30min後517nm，結果卻都不同(三份期刊加入比例都不同)

以下我就用代號簡稱，麻煩高手幫我解惑

A(DPPH+甲醇) B(蝦紅素各標準品濃度)


先是

1期刊 A:B = 250μL: 50μL
2期刊 A:B = 300μL: 50μL
3期刊 A:B = 200μL: 50μL


問題一
這三份期刊的比例我都照著做，30分鐘後發現517nm照射下，居然吸收度都比原先空白DPPH
溶液還高(個人研判，是不是B濃度太高，A濃度太低，以至於蝦紅素吃掉了DPPH)，請問為
何?




問題二
如果一切實驗方法都正確，是不是"照理說"，高濃度的B越會讓DPPH吸收度下降?



問題三
如果是用不同濃度標準品做出來的結果，"通常"圖中X與Y軸(濃度與抑制率)會是跟"檢量

線"一樣有著線性的R值(也就是說濃度越高抑制率越高，並且等比例直線上升)，還是會呈

現"急升後開始緩慢"(隨濃度越高，抑制率變成愈來越緩慢上升)直到最後不管濃度提高到

多高，抑制率都平行(達到飽和)


問題四
用此方法好像都是以 IC50為判斷點(抑制率超過50%時的濃度是多少)，可是這好像也跟
DPPH的濃度有關是不是? 因為同樣IC50時，DPPH如果濃度越高，B卻需要越高濃度才可以
達到IC50(問題四如果有任何說錯，請糾正我)


問題五
所以一開始我不知道DPPH濃度的缺點就是，有可能B濃度太高(比DPPH濃度高)，導致測517
nm時，因為B都把DPPH吃光光了，測出來的吸收度反而是測到B的，這樣說是對的嗎?
如果是對的，應該要先測此DPPH溶液的吸收度，然後再以"不超過此DPPH吸收度"加入低於
此吸收度的B濃度，才有可能正確





謝謝大家

※ 編輯: jj5110 來自: 210.240.249.162 (06/25 20:17)