作者Tendin1015 (Tendin)
看板Biotech
標題[求救] 一個 100 mm 的 dish 可以養多少細胞呢?
時間Fri Dec 9 01:13:08 2011
第一次做細胞實驗,實驗室之前也沒有人做過細胞實驗,
所以我想問問各位前輩,進行正式實驗時,一個 dish
裡面可以養到多少細胞呢?因為之後還要跑 western,
不知道怎麼樣的細胞數會比較合適。
另外就是一個 dish 裡面需要含有多少體積的培養基呢?
而在細胞 lysis 時,需要加多少 lysis buffer 比較好呢?
麻煩各位前輩指點,也祝大家實驗順利。
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◆ From: 1.175.86.168
推 FireHell:不要養到全滿就好,體積大概5000~20000cells/mL去換算 12/09 01:58
→ FireHell:實驗前後細胞密度要一致 12/09 01:59
→ FireHell:以10 cm dish而言,通常加10~12 mL medium 12/09 01:59
→ FireHell:lysis buffer的部份要看廠商提供的protocol 12/09 02:01
→ FireHell:一般而言,細胞越大,密度越低;細胞越小,密度越大 12/09 02:02
→ blence:無論是seeding前或收細胞,上面的細胞濃度至少了一個數量級 12/09 09:47
→ Tendin1015:我想用 3x10^6 顆不知道會不會太多? 12/09 12:10
→ Tendin1015:因為我的細胞在 96-well 可以 5x10^4 cells/well 12/09 12:11
→ Tendin1015:謝謝 conective,這對我很有幫助。 12/09 12:13
→ Tendin1015:可是因為我的試驗物質有點昂貴,我想說能不能省一點改 12/09 12:14
→ Tendin1015:用 5~6 ml 的 medium 呢? 12/09 12:14
推 mandible:3三樓你很有錢喔!我都只加6ml而已!! 12/09 12:34
→ mandible:你要看你的細胞大小.來決定你的western量.應該會定量吧! 12/09 12:35
→ Tendin1015:恩,會定量。 所以 medium 用 5 ml 應該也 OK 吧? 12/09 13:26
推 FireHell:抱歉我最前面打錯了,要加一個0。50000~200000 cells/mL 12/09 15:14
→ FireHell:我的sample也超貴(1 mg => 10k),但是你還是要統一細胞密 12/09 15:15
→ FireHell:度,我指的是你應該跟前面的任何實驗統一密度 12/09 15:18
→ FireHell:因此你medium少細胞也會少,western需要不少的細胞來提供 12/09 15:19
→ FireHell:足夠的蛋白,以我的Hep 3B為例,我濃度是50000 cells/mL 12/09 15:20
→ FireHell:1盤10 mL,CONTROL都一次重三盤全收,大概可以壓十次 12/09 15:20
→ FireHell:每次是50 ug 12/09 15:21
→ alicialai:這些問題實驗室前輩應該都有protocol吧~ 可以詢問看看~ 12/12 05:39
→ alicialai:喔不好意思沒看到您的第一句話~ 抱歉~ 12/12 05:40
→ alicialai:可以去問問隔壁實驗室? 12/12 05:40
→ alicialai:我養RAW cell, 10cm dish, ~90 confluent約3x10^7 cell 12/12 05:42