我現在用PAGE跑product的電泳，buffer是用TAE

我學長是教我用硝酸銀定影，不過到目前為止學長說他連marker都看不到一直失敗

我是剛剛接觸這方面的實驗，不太清楚，不過在攝影時沖洗照片使用硝酸銀定影時

需要避光，難道PAGE定影可以不用嗎？

請各位先進指導指導，謝謝！

還有，聽說用TAE buffer時不能用一般使用的 EtBr，是為什麼呢？

只能再用TBE buffer時用嗎？

如何選擇使用TBE buffer或TAE buffer?

謝謝！感激不盡






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☆ [Origin:椰林風情] [From: 163.31.14.145 ] [Login: **] [Post: **]

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作者: chcl (害死自己啦...) 看板: Biology
標題: Re: 請問TAE buffer
時間: Mon Jan 4 20:11:35 1999

※ 引述《[email protected] (YUKO)》之銘言：
: 我現在用PAGE跑product的電泳，buffer是用TAE
: 我學長是教我用硝酸銀定影，不過到目前為止學長說他連marker都看不到一直失敗
: 我是剛剛接觸這方面的實驗，不太清楚，不過在攝影時沖洗照片使用硝酸銀定影時
: 需要避光，難道PAGE定影可以不用嗎？
: 請各位先進指導指導，謝謝！
: 還有，聽說用TAE buffer時不能用一般使用的 EtBr，是為什麼呢？
: 只能再用TBE buffer時用嗎？
: 如何選擇使用TBE buffer或TAE buffer?
: 謝謝！感激不盡
不會吧..
我用TAE跑電泳..
也是用EtBr染色...
在用紫外線照就可以看見band..
不過要注意..
配agarose gel用的溶劑要和buffer一樣..
向用0.5X TAe跑配的時候就要用0.5XTAE..
不然會跑不出來...


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發信人: [email protected] (bee), 看板: Biology
標 題: Re: 請問TAE buffer
發信站: 交大資工鳳凰城資訊站 (Mon Jan 4 21:10:47 1999)
轉信站: Ptt!news.ntu!ctu-gate!news.nctu!news.ee.nctu!alab03.ee.nctu!news.csie.

==> 在 [email protected] (YUKO) 的文章中提到:
: 我現在用PAGE跑product的電泳，buffer是用TAE
: 我學長是教我用硝酸銀定影，不過到目前為止學長說他連marker都看不到一直失敗
: 我是剛剛接觸這方面的實驗，不太清楚，不過在攝影時沖洗照片使用硝酸銀定影時
: 需要避光，難道PAGE定影可以不用嗎？

攝影方面的定影應該不須要刻意的避光
硝酸銀定影好像基本的 chemical 不太一樣...


: 請各位先進指導指導，謝謝！





: 還有，聽說用TAE buffer時不能用一般使用的 EtBr，是為什麼呢？
: 只能再用TBE buffer時用嗎？

跑了快十年的 TAE agarose 電泳
沒聽說過這樣的說法
你的 product 大小有多少
說來聽聽




: 如何選擇使用TBE buffer或TAE buffer?
: 謝謝！感激不盡

TAE 在大部份的 agarose 電泳均可
但缺點是跑太久會 pH　會跑掉就會出狀況
也有人死不肯換但沒啥太大問題

TBE 比 TAE 來的貴 (成本上)
但在看小分子量的時候可以讓 band 的解像力比較好
也有人資本雄厚所有的電泳一種 TBE 玩到底
並且跑長時間 pH 不易變化
很多長時間的電永都用這種 buffer

你的產物若是不大
選 PAGE 用 TBE 來跑應該不錯 (20bp-90bp) 應該不錯
若是大於 200-500 bp 用 TAE 4% agarose EtBr 預先加在 gel 中
也可以清楚看到
但大於 1kb 以上 1% agarose TAE 跑完放在 EtBr 的染缸染一陣子就一定沒問題了

您再試試看





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發信人: [email protected] (天、地、生命), 看板: Biology
標 題: Re: 請問TAE buffer
發信站: 台大計中椰林風情站 (Tue Jan 5 15:17:58 1999)
轉信站: Ptt!news.ntu!Palmarama

==> [email protected] (害死自己啦...) 提到:
> ※ 引述《[email protected] (YUKO)》之銘言：
> 不會吧..
> 我用TAE跑電泳..
> 也是用EtBr染色...
> 在用紫外線照就可以看見band..
> 不過要注意..
> 配agarose gel用的溶劑要和buffer一樣..
> 向用0.5X TAe跑配的時候就要用0.5XTAE..
^^^^^^^^^^^^^^^^^^^^^^^^^^^^^這不一定對

> 不然會跑不出來...

通常用是用一樣的buffer....

可是如果用不一樣的還是可以做得出來

有一國的說法是：

如果你用1X TAE gel 配合 0.5X TAE buffer...

因為buffer的離子量相對較少

你的DNA sample反而可以跑得比較快
因為外面的電阻較大

聽起來很有道理吧？
不過我想是聽聽就好。

我只是要說：

沒有什麼會是做不出來的
只要會導電，也許要等，可是還是做得出來。

"Question Everything!!"

possu


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作者: chcl (害死自己啦...) 看板: Biology
標題: Re: 請問TAE buffer
時間: Tue Jan 5 19:48:59 1999

※ 引述《[email protected] (天、地、生命)》之銘言：
: ==> [email protected] (害死自己啦...) 提到:
: > 不會吧..
: > 我用TAE跑電泳..
: > 也是用EtBr染色...
: > 在用紫外線照就可以看見band..
: > 不過要注意..
: > 配agarose gel用的溶劑要和buffer一樣..
: > 向用0.5X TAe跑配的時候就要用0.5XTAE..
: ^^^^^^^^^^^^^^^^^^^^^^^^^^^^^這不一定對
: > 不然會跑不出來...
: 通常用是用一樣的buffer....
: 可是如果用不一樣的還是可以做得出來
: 有一國的說法是：
: 如果你用1X TAE gel 配合 0.5X TAE buffer...
: 因為buffer的離子量相對較少
: 你的DNA sample反而可以跑得比較快
: 因為外面的電阻較大
: 聽起來很有道理吧？
: 不過我想是聽聽就好。
: 我只是要說：
: 沒有什麼會是做不出來的
: 只要會導電，也許要等，可是還是做得出來。
: "Question Everything!!"
: possu
不是吧...
當初我用water gel配0.5XTAEbuffer
結果sample就到處亂跑..
也不是說亂跑..
就是結果很怪就對了...


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發信人: [email protected] (無念), 看板: Biology
標 題: Re: 請問TAE buffer
發信站: 興大天樞資訊網 (Tue Jan 5 19:33:37 1999)
轉信站: Ptt!news.ntu!ctu-gate!ctu-peer!news.nctu!news.nchu!Pivot

==> 在 [[email protected]] 文中提到:
: 來 源: ptt.csie.ntu.edu.tw
: ※ 引述《[email protected] (YUKO)》之銘言：
: : 我現在用PAGE跑product的電泳，buffer是用TAE
: : 我學長是教我用硝酸銀定影，不過到目前為止學長說他連marker都看不到一直失敗
: : 我是剛剛接觸這方面的實驗，不太清楚，不過在攝影時沖洗照片使用硝酸銀定影時
: : 需要避光，難道PAGE定影可以不用嗎？
: : 請各位先進指導指導，謝謝！
: : 還有，聽說用TAE buffer時不能用一般使用的 EtBr，是為什麼呢？
: : 只能再用TBE buffer時用嗎？
: : 如何選擇使用TBE buffer或TAE buffer?
: : 謝謝！感激不盡
: 不會吧..
: 我用TAE跑電泳..
: 也是用EtBr染色...
: 在用紫外線照就可以看見band..
: 不過要注意..
: 配agarose gel用的溶劑要和buffer一樣..
: 向用0.5X TAe跑配的時候就要用0.5XTAE..
: 不然會跑不出來...

這可不一定,我曾這樣跑過,但沒問題~(我是自己去 test 的)

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發信人: [email protected] (天、地、生命), 看板: Biology
標 題: Re: 請問TAE buffer
發信站: 台大計中椰林風情站 (Wed Jan 6 09:33:20 1999)
轉信站: Ptt!news.ntu!Palmarama

> 不是吧...
> 當初我用water gel配0.5XTAEbuffer
> 結果sample就到處亂跑..
> 也不是說亂跑..
> 就是結果很怪就對了...

我的意思不是說你可以用water gel來做

因為water跟buffer 比起來電阻又要大得多
而且你的sample在Gel中反而會變成
被導電性不良的gel 繞著

我想這會是很大的問題....

如果你用的伏特很高的話也許會把你的Gel熔掉

而且...
哦～如果你有看清礎的話
我說的是用1X TAE gel + 0.5 buffer...

在Gel中的buffer 比外頭要高。

看有沒有人有空來做這個實驗....

我本來的意思是，別的方法還是可以用
不過當然平常人都是用一比一，
除了方便以外
防止不同濃度的buffer exchange影響結果
當然也可能是原因

possu


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發信人: [email protected] (蚵仔麵線), 看板: Biology
標 題: Re: 請問TAE buffer
發信站: willbbs (Wed Jan 6 15:03:51 1999)
轉信站: Ptt!news.ntu!will

: 不是吧...
: 當初我用water gel配0.5XTAEbuffer
: 結果sample就到處亂跑..
: 也不是說亂跑..
: 就是結果很怪就對了...

做gel用的buffer濃度最好與電泳時buffer的濃度相同，
如果不行，gel用的buffer濃度不能比電泳用buffer濃度低....



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發信人: [email protected] (無念), 看板: Biology
標 題: Re: 請問TAE buffer
發信站: 興大天樞資訊網 (Thu Jan 7 17:19:46 1999)
轉信站: Ptt!news.ntu!ctu-gate!ctu-peer!news.nctu!news.nchu!Pivot

==> 在 [[email protected]] 文中提到:
: 來 源: will.m1.ntu.edu.tw
: : 不是吧...
: : 當初我用water gel配0.5XTAEbuffer
: : 結果sample就到處亂跑..
: : 也不是說亂跑..
: : 就是結果很怪就對了...
: 做gel用的buffer濃度最好與電泳時buffer的濃度相同，

這可不一定,要看你買的是那一家的電泳槽.
像 COSMO BIO CO., 的 Mupid-2 就建議用 0.5X 的 buffer 來跑,
gel 還是用 1X 的....所以多看看 說明書吧~


: 如果不行，gel用的buffer濃度不能比電泳用buffer濃度低....